Guía Práctica

Cómo Calibrar Micropipetas Paso a Paso (Guía Técnica)

La calibración de micropipetas por método gravimétrico es el procedimiento de referencia de la ISO 8655: se pesa el agua dispensada y se convierte a volumen. Aquí tienes la guía técnica completa, desde el equipo necesario hasta los cálculos.

Equipo necesario

• Balanza analítica con resolución adecuada al volumen (0.001 mg para 1–10 µL; 0.01 mg para 10–100 µL; 0.1 mg para >100 µL), calibrada y en superficie antivibratoria.
• Agua destilada o desionizada grado 3 según ISO 3696, equilibrada a la temperatura ambiente del laboratorio.
• Termómetro calibrado para medir la temperatura del agua (resolución 0.1 °C).
• Barómetro e higrómetro para registrar presión atmosférica y humedad relativa.
• Trampa de humedad (recipiente con agua dentro de la cámara de pesada) para volúmenes menores a 50 µL, minimizando la evaporación.
• Puntas nuevas compatibles con la pipeta bajo calibración.

Condiciones ambientales

ISO 8655-6 exige: temperatura ambiente entre 15 y 30 °C, estable dentro de ±0.5 °C durante el ensayo; humedad relativa mayor al 50 %; y que pipeta, puntas y agua lleven al menos 2 horas equilibrándose en la sala de calibración.

Procedimiento paso a paso

• 1. Inspección inicial: revisar cono, émbolo, expulsor y ajuste de volumen. Documentar el estado 'as found'.
• 2. Seleccionar los puntos de ensayo: volumen nominal (100 %), ~50 % y el 10 % del nominal (o el mínimo útil).
• 3. Prehumedecer la punta: aspirar y dispensar 3 veces antes de la primera medición.
• 4. Dispensar en el recipiente de pesada: 10 mediciones por punto de ensayo, registrando la masa de cada dispensado.
• 5. Registrar condiciones: temperatura del agua en cada serie, presión y humedad.
• 6. Convertir masa a volumen: aplicar el factor Z (µL/mg), que corrige por densidad del agua y empuje del aire según temperatura y presión.
• 7. Calcular resultados: error sistemático (diferencia entre media y volumen nominal) y error aleatorio (desviación estándar / coeficiente de variación).
• 8. Evaluar contra tolerancias ISO 8655 y estimar la incertidumbre expandida.

Cálculos principales

El volumen de cada dispensado se obtiene como V = m × Z, donde m es la masa en mg y Z el factor de corrección (típicamente ≈ 1.0032 µL/mg a 21.5 °C y 101.3 kPa). El error sistemático es e_s = V̄ − V₀ (media menos volumen seleccionado) y el error aleatorio se expresa como la desviación estándar de repetibilidad s_r o como CV %.

¿Calibración interna o con laboratorio acreditado?

La verificación interna es útil como control intermedio, pero no sustituye la calibración acreditada: sin patrones trazables, incertidumbre evaluada y competencia demostrada, el resultado no tiene validez formal ante auditores. La práctica recomendada es combinar calibración acreditada periódica con verificaciones internas rápidas entre servicios.