Buenas Prácticas · Pipeteo
10 Errores Comunes al Pipetear y Cómo Evitarlos
Aunque la técnica de pipeteo parece sencilla, los errores en su ejecución son la causa más frecuente de resultados analíticos fuera de especificación en laboratorio. Un estudio de Eppendorf indica que el 60% de los errores en ensayos moleculares tienen origen en errores de pipeteo, no en la pipeta en sí.
Conocer estos errores y corregirlos puede mejorar la reproducibilidad de tus resultados sin necesidad de cambiar instrumentos. Y si después de corregir la técnica los resultados siguen siendo variables, probablemente es momento de enviar la pipeta a calibración.
No acondicionar la punta antes del primer pipeteo
El problema: La punta de la micropipeta es de plástico y no está saturada de vapor del líquido a pipetear. En los primeros pipeteos, el líquido se evapora parcialmente dentro de la punta, generando volúmenes menores al nominal.
La solución: Realizar 3–5 "pipeteos de acondicionamiento" (aspirar y dispensar el líquido sin pesar) antes de iniciar la serie de mediciones. Esto satura la punta con vapor del líquido de trabajo.
Impacto en el volumen: Error sistemático negativo en los primeros pipeteos (puede alcanzar 1–3%).
Pipetear con la micropipeta inclinada
El problema: Pipetear en ángulo (no vertical) durante la aspiración modifica el volumen aspirado por efecto de la columna de líquido y la presión hidrostática.
La solución: Mantener la micropipeta vertical (90°) durante la aspiración y en un ángulo de 20–45° durante la dispensación para evitar que el líquido entre en el cuerpo de la pipeta.
Impacto en el volumen: Error sistemático variable; mayor en volúmenes pequeños (< 10 µL).
No sumergir la punta a la profundidad correcta
El problema: Sumergir demasiado la punta (> 5 mm) genera un exceso de líquido adherido al exterior. Sumergir muy poco crea un efecto de succión de aire.
La solución: Sumergir la punta 2–3 mm para pipetas ≥ 100 µL y 1 mm para pipetas < 100 µL.
Impacto en el volumen: Error sistemático positivo (exceso de líquido por adherencia exterior).
Presionar el émbolo más allá del primer punto de parada
El problema: Las micropipetas tienen dos puntos de parada: el primero define el volumen nominal y el segundo es un "soplado final" para expulsar residuos. Presionar hasta el segundo punto durante la aspiración introduce más volumen del programado.
La solución: Aspirar solo hasta el primer punto de parada. El segundo punto ("blow-out") solo debe usarse durante la dispensación de líquidos viscosos o cuando se requiere vaciado total.
Impacto en el volumen: Error sistemático positivo, que puede ser de 5–10% del volumen nominal.
Temperatura del líquido diferente a la de la micropipeta
El problema: Si el líquido está más frío o más caliente que la micropipeta, la diferencia de temperatura afecta el volumen de la burbuja de aire interna y por tanto el volumen aspirado.
La solución: Equilibrar el líquido a temperatura ambiente antes de pipetear. Para líquidos que deben mantenerse fríos (ej. enzimas), acondicionar la pipeta y las puntas a la temperatura del trabajo.
Impacto en el volumen: Aproximadamente 0.02% por cada °C de diferencia (relevante en líquidos muy fríos).
Pipetear líquidos viscosos sin ajustar la técnica
El problema: Los líquidos viscosos (glicerol, DMSO, polietilenglicol) fluyen más lento que el agua. Con la técnica estándar se aspira menos volumen del nominal.
La solución: Usar el modo de pipeteo reverso: presionar hasta el segundo punto de parada antes de sumergir la punta, aspirar lentamente, dispensar solo hasta el primer punto y desechar el residuo que queda en la punta.
Impacto en el volumen: Error negativo que puede superar el 5% con viscosidades altas.
No secar el exterior de la punta tras aspirar
El problema: Al extraer la punta del líquido, puede quedar una gota adherida al exterior. Al dispensar, esta gota se añade al volumen nominal generando un exceso.
La solución: Después de aspirar y antes de dispensar, secar el exterior de la punta con papel absorbente suave, rozando solo la superficie lateral sin tocar el orificio.
Impacto en el volumen: Error sistemático positivo, especialmente relevante en volúmenes < 100 µL.
Dispensar demasiado rápido
El problema: Presionar el émbolo con fuerza o velocidad excesiva genera turbulencias en el líquido dispensado, salpicaduras y aerosoles, que reducen el volumen efectivamente depositado.
La solución: Dispensar lentamente y de forma uniforme, manteniendo la punta en contacto con la pared del recipiente receptor a 30–45°.
Impacto en el volumen: Pérdida de volumen por aerosol (0.1–0.5%) y riesgo de contaminación cruzada.
Usar puntas incompatibles con la micropipeta
El problema: Las puntas no originales o de baja calidad no forman un sello hermético con el cono de la micropipeta. Esto genera fugas de aire que reducen el volumen aspirado e introduce incertidumbre.
La solución: Usar puntas certificadas por el fabricante de la micropipeta o con certificado de compatibilidad. Siempre verificar que la punta encaje firmemente con un giro o presión suave.
Impacto en el volumen: Variable; puede llegar a 2–5% de error en pipetas de pequeño volumen.
No calibrar la micropipeta periódicamente
El problema: Con el tiempo y el uso, el sello de émbolo se desgasta, los resortes pierden tensión y la calibración deriva. Una micropipeta puede estar fuera de tolerancia ISO 8655 sin ningún signo visible externo.
La solución: Establecer un programa de calibración periódica: mínimo anual para laboratorios de baja criticidad, semestral o trimestral para laboratorios bajo GMP/GLP/ISO 17025. Externalizar a un laboratorio acreditado EMA.
Impacto en el volumen: Error sistemático acumulado que puede superar las tolerancias ISO 8655 sin que el operador lo note.
Resumen: Los Factores que Más Afectan el Pipeteo
| Factor | Error típico | Afecta más a |
|---|---|---|
| Pipeta sin calibrar | 1–5% | Todos los volúmenes |
| Falta de acondicionamiento | 1–3% | Primeros pipeteos del día |
| Líquido viscoso sin ajuste | >5% | Glicerol, DMSO, PEG |
| Ángulo incorrecto de aspiración | 0.5–2% | Volúmenes < 100 µL |
| Puntas incompatibles | 1–5% | Volúmenes < 50 µL |
| Diferencia de temperatura | 0.1–0.5% por °C | Líquidos fríos (< 15°C) |
¿Corregiste la técnica pero los resultados siguen siendo variables? El problema puede estar en la pipeta. Envíala a calibración con Calbrex — laboratorio acreditado EMA.
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